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植物光合热释光测量系统
植物光合热释光测量系统是研究光合作用的强有力的工具,是研究PSII电子传输的有效探针,广泛应用于除草剂对PSII的受体效应、QA与QB稳定性、光合放氧复合物(OEC)稳定性及PSII总体完整性等,还用于光合突变个体的筛选等。
是针对研究PSII能量水平结构而设计的。PSII反应中心光诱导电荷分离导致储存了吸收光能的激发电子对的累积。加热诱导这些激发电子对的重组,从而引发光释放,并在一定温度范围内形成特异性热释光曲线。根据不同释光曲线的形状、峰位和峰值,可以研究分析关于特定激发电子对的能量稳定性及PSII反应中心功能等。TL200系列热释光测量仪的测量范围为-90°C到+190°C,使用范围更宽,可以对低温、高温段热释光进行研究。
应用领域
- 光合机理研究——捕光色素复合体,PSII反应中心,放氧复合物研究;PSII能级分析;原初反应阶段的内在过程探测
- 植物胁迫生理的早期检测与诊断
- 植物病虫害相关研究
- 除草剂影响
- 对植物光合研究的完善补充
典型样品
植物碎片
各种微藻
叶绿体悬浮液
类囊体悬浮液
工作原理
热释光(Thermoluminescence,缩写TL)是晶体受到辐射照射后,会产生自由电子,这些电子被晶格缺陷俘获而积攒起来,在加热过程中以光形式释放出来。其基本的实验过程是将叶片快速冷冻到某一温度,之后给叶片一个足够强,但时间尽量短(一般<5µs)的单翻转光(single turn-over ?ash),用于诱导每个PSII反映中心发生仅一次的电荷分离;然后逐渐升温,同时测量叶片放出的热释光,绘制TL谱带。
热释光研究中的一个主要工具是单次翻转光闪,要求足够强(光源强度高达 150 000 µmol(photons).m-2.s-1)和足够短(典型 < 5 微秒)来诱导每一个PSII反应中心发生一次,且仅一次的电荷分离。光闪的饱和效果可以通过QB段的强度来检查,它应该在*光闪后达到zui大,在2次光闪后不再增加。当前许多实验中使用的氙灯光闪具有明显缺陷——一个长的持续发光,或者“闪光拖尾”,这会在某些PSII反应中心中产生两次的电荷分离(连击)。虽然激光闪光能够有效降低连击,但不能消除。
TL200系列热释光测量仪使用能量足够强的LED光源,所释放5-10µs的方波脉冲能够饱和所有的PSII反应中心,其温度控制单元可以在降温后,再使样品的温度以0.1℃/sec到 2℃/sec的速率线性增加。不同的闪光序列及样品处理能够使样品处于不同的能量状态,不同的温度下释放的光能源自光合机构的不同结构。分析释光曲线的形状、峰位和峰值,可以研究分析关于特定激发电子对的能量稳定性及PSII反应中心功能等。
热释光与光合机构间关系
TL200系列热释光测量仪三种型号的控温方式与范围
具体型号 | 控温方式 | 控温范围 |
TL200/PMT标准版 | 水冷单元——控温模块 | -25 ℃ 到+70 ℃ |
TL300/HT高温版 | 水冷单元——高温控制模块 | -25 ℃ 到+190 ℃ |
TL400/LT液氮版 | 水冷单元——液氮制冷单元——控温模块 | -90 ℃ 到+70 ℃ |
系统组成
TL200系列热释光测量系统由3部分组成:多功能控制单元、温度调节器控制单元及测量室 。
多功能控制单元(Multipurpose Control Unit)根据用户定义方案或热发光向导提供的实验程序来执行实验过程,有两个输入频道,一个用于测量热发光信号(TL信号),另一个用于测量温度。 测量曲线以两种格式显示:时间/温度和时间/TL信号,或温度/TL信号。
温度调节器控制单元(Thermoregulator Control Unit)可以在-90°C 到 +190°C范围内以0.1°C的精确度控制样品的温度。 系统前面板可以显示实际的温度,温度调节可以通过手动或程序控制(软件)来实现。有两种工作模式:恒温模式和温度梯度模式,在恒温模式下仪器将维持样品在恒定的温度,而在温度梯度模式下,可以使样品的温度以0.1°C/sec到 2°C/sec的速率线性变化。
AC-88水冷单元可将系统温度降低到4°C,包含一个电子控制的抽水泵和内部可以储水的制冷器,用于降低测量室的环境温度。
CryoFab液氮罐通过管路连接到测量室,通过电子控制的低温输出阀可以将系统温度控制在 -20°C 到 -90°C。
由TFPE单元控制的辅助加热模块可以将系统温度加热到+190°C。
测量室(Measuring Chamber)又包括四个关键组成部分:光源、 光电倍增器、A/D 转换器、具有温度控制器的样品盘:
- 光源由8个超亮的发光二极管(λmax=630 nm)组成,发射的光闪强度高达150,000 µmol(photons). m-2.s-1以上,光闪持续时间zui长为150 µs(典型5-10us),光强和光闪持续时间通过软件控制。
- 光电倍增器可以探测从300到900nm范围的光量子,从而测量热发光信号和缓发荧光。光电倍增器包括自己的电源。
- A/D转换器用于光电倍增器的电流放大、软件控制增益和数字化,放大器的时间反应固定在50ms,以确定zui小取样周期到100ms。
技术参数
- 温度范围:
TL200/PMT标准版:-25 ℃ 到+70 ℃
TL 300/HT高温版:-25 ℃ 到+190 ℃
TL 400/LT液氮版:-90 ℃ 到+70 ℃
- 控温模式:恒温;线性变化(0.1ºC/sec - 2ºC/sec)
- 过热保护:提供
环境光保护:提供 - 控制模式:手动(恒温);程序设定温度曲线
- 样品盘:直径½英寸镀金铜盘
- 测量样品:藻类、蓝细菌、叶绿体悬浮液,叶片碎片等
- 光源:波长lmax=625nm,光源强度高达 150 000 µmol(photons). m-2.s-1以上
- 探测系统:传感器为可以通过软件灵敏控制的光电倍增器,光谱响应为300nm-900nm,zui小取样周期100ms,时间响应50ms,接通延迟100ms
- 控制:用户可通过语言自定义程序控制仪器测量过程
- 通讯:USB
- 软件:FluorWin 3.6
- 电源:90V-240V
操作软件与实验结果
典型应用
上图为源自拟南芥未冷冻叶片的热释光(M.Roman ,1998)。实心符号:对照(a);空心符号:轻度脱水(b)。单闪(细线)产生75%的S2和25%的S1(只有S2和S3产生热释光,S1无),双闪(粗线)25%的S2和75%的S3,3闪(点线)25%的S3。a、对照植物。单闪后,热释光B段与S2QB-相*(B2,见表1)且可以被单因子拟合得很好。2次闪光后,则需要3个因子,S2QB-(B1),S3QB-(B2)和一个剩余因子(未显示)。b、适度脱水的植物。B段下调,S3比S2在更大程度上表明了类囊体腔内一个暗稳态的酸性pH。45摄氏度段(余辉)源自S2/3QB中心中热诱导的从基质还原剂向QB的电子传递,使它们发光:它的增加表明了一个强的同化势能NADP+ATP(Ducruet 2003)。
产地:欧洲
参考文献:(仅2011年发表的部分文献,77篇中的14篇)
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